四環(huán)素廣泛用做抗菌藥，四環(huán)素類抗生素主要包括土霉素、四環(huán)素(TC)和金霉素(CTC)，目前常用于預防和治療動物疾病。如果不合理地使用該類藥物，如劑量過大，用藥時間過長，濫用藥物以及不遵守休藥期提前屠宰等都會使該類藥物殘留于動物組織及牛乳中，被人們食用后帶來極大危害，可造成致畸、致癌。為了有效預防四環(huán)素類藥物的濫用，我國明確規(guī)定四環(huán)素類藥物在牛乳中的大殘留*。

1．速測原理

采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物四環(huán)素類藥物將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭四環(huán)素類藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素類藥物的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物四環(huán)素類藥物的含量。

2．速測范圍

本法適用于動物組織(豬、雞、魚、蝦)、牛乳、蜂蜜中的四環(huán)素類藥物殘留。檢測下限10ug/kg。

3．速測步驟

(1)取約5g樣品于研缽中，加入一瓶提取劑研磨約3～5min，用濾紙過濾后擠干殘渣，收集濾液5mL。

(2)依次加2mL再生劑、5mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄，將濾液加入層析柱過柱，吸耳球上加壓，廢液舍棄，待濾液流干后，用5mL蒸餾水(純凈水)于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(3)用0.8mL洗脫劑加到此層析柱中，吸耳球上加壓，接流出液于點滴板上，自然揮干后，用0.3 mL PBST充分溶解殘留物，將液體移取到5mL離心管中，加0.3mL凈化劑，振搖，靜置，吸取至少100uL下層溶液待檢。

4．結(jié)果判定(圖4-4)

(1)陰性(-)。T線(測試線，靠近加樣孔一端)比C線(對照線)深或一樣深，表示樣品中四環(huán)素濃度低于檢出限或不含四環(huán)素殘留物。

(2)陽性(+)。T線比C線淺，或T線無顯色，表示樣品中四環(huán)素濃度高于檢出限；T線比C線越淺，表示樣品中四環(huán)素濃度越高。

(3)無效。未出現(xiàn)C線，表示操作過程不正確或試劑板已變質(zhì)失效。此情況下，應仔細閱讀說明書，并用新的試劑板重新測試。

5．說明

(1)使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復至室溫；

(2)盡量不要觸摸試劑板中央的白色膜面；

(3)層析柱再生：層析柱可重復使用，用完后的層析柱依次加2mL再生劑及5mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。可備下次使用。

文章來源：《食品安全快速檢測技術》

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